檢驗科醫(yī)用顯微鏡對樣品確實存在特殊要求,這些要求主要圍繞確保成像質(zhì)量、提高檢測準(zhǔn)確性而設(shè)計。以下從樣品特性、制備規(guī)范到臨床應(yīng)用,為您詳細解析:
一、核心樣品要求
1. 清潔度
標(biāo)準(zhǔn):樣品表面需無油脂、污漬或雜質(zhì),確保光線穿透性。
案例:骨髓涂片檢測前需用甲醇固定并去除纖維蛋白,避免干擾白細胞觀察。
2. 透明度
標(biāo)準(zhǔn):需觀察內(nèi)部結(jié)構(gòu)的樣品(如組織切片)需保證透明度。
處理技術(shù):
不透明樣品:通過染色(如HE染色)、鍍膜或超薄切片(厚度<1μm)處理。
特殊場景:尿液結(jié)晶分析需離心后取沉淀物,避免渾濁液體影響成像。
3. 尺寸與形狀
適配原則:樣品需與載物臺及視場匹配,通常要求:
直徑:<50mm(如組織切片需貼合載玻片尺寸)。
厚度:切片樣品<5μm,三維物體需<15mm高度。
4. 表面處理
平整度:需拋光或打磨至鏡面效果(如金屬疲勞裂紋檢測)。
反射增強:陶瓷樣品可鍍金膜提升對比度。
二、不同檢驗項目的特殊需求
檢驗項目 | 樣品要求 | 制備技術(shù) |
血液學(xué) | 新鮮血液需EDTA抗凝,推片角度控制(25°-35°) | 瑞氏-吉姆薩染色,細胞形態(tài)學(xué)分析 |
微生物學(xué) | 痰標(biāo)本需液化處理,膿液需涂片干燥固定 | 革蘭氏染色或抗酸染色,油鏡觀察 |
腫瘤篩查 | 宮頸細胞需液基薄層制片(TBS) | 巴氏染色,異常細胞核質(zhì)比分析 |
寄生蟲檢測 | 糞便需過濾濃縮,蟲卵需透明化處理 | 盧戈氏碘液染色,阿米巴原蟲觀察 |
三、樣品制備技術(shù)影響
固定與脫水:
電鏡樣品:需戊二醛固定+乙醇梯度脫水,避免細胞自溶。
免疫熒光:需多聚甲醛固定,保留抗原活性。
切片與染色:
石蠟切片:厚度4-6μm,HE染色區(qū)分細胞類型。
冰凍切片:用于酶活檢測,需-20℃速凍。
特殊染色技術(shù):
銀染:顯示網(wǎng)狀纖維(如腎活檢標(biāo)本)。
PAS染色:檢測真菌細胞壁多糖成分。
四、不達標(biāo)樣品的處理方案
渾濁液體:
離心+涂片:如腦脊液細胞學(xué)檢查。
過濾稀釋:尿液管型分析需過濾黏液絲。
脆弱樣品:
低溫包埋:眼球組織冷凍切片避免冰晶損傷。
樹脂滲透:神經(jīng)組織電鏡標(biāo)本需環(huán)氧樹酯包埋。
磁性樣品:
去磁處理:血液磁珠分選后需消磁,避免干擾物鏡磁場。
五、質(zhì)量控制要點
制備后驗證:用低倍鏡預(yù)掃確認無氣泡/裂痕。
染色對照:設(shè)置陽性/陰性對照片,確保染色特異性。
記錄追蹤:標(biāo)注樣品來源、制備時間及方法。
通過嚴(yán)格遵循這些要求,可顯著提升檢驗科醫(yī)用顯微鏡的檢測效率和診斷準(zhǔn)確性。例如,規(guī)范的骨髓涂片制備能使白血病細胞識別率從65%提升至90%以上。